O Windows 3.00 foi o primeiro sucesso amplo da Microsoft e foi lanado em 22 de Maio de 1990. Ao contrrio das verses anteriores, ele era um Windows completamente novo. Tecnicamente hoje, esta verso considerada o primeiro sistema grfico da empresa. Era um sistema grfico de 16 bits, mas ainda precisava ativar primeiro o MS-DOS para ativar o Windows. Substituiu o MS-DOS Executive pelo Gerenciador de Programas e o Gerenciador de Arquivos que simplificavam as aplicaes e tornava o sistema mais prtico. Melhorou bastante a interface, o gerenciamento de memria e o sistema multitarefa e incluiu o suporte s fontes True Type. Conseguiu ultrapassar o limite de 1 MB do MS-DOS e permitiu a utilizao mxima de 16 MB de aplicaes. Naquela poca era o nico possvel de compatibilizar todos os programas das verses anteriores. Utilizava o CPU Intel 80286 e Intel 80386. Tambm existe a verso 3.00a, que foi lanada em 31 de Outubro de 1990.