Na guitarra, os jogadores devem segurar botes especficos alinhados a combinaes de cinco notas coloridas que aparecem na tela em uma "highway", que simula um brao de guitarra; quando as notas atingem o final desta highway, o jogador deve palhetar para acertar as notas no ritmo da msica. As notas podem ser singulares ou mltiplas de uma vez, formando um acorde. As notas podem tambm ser sustentadas, nas quais o jogador deve segurar o(s) boto(s) correspondente(s), aps palhetar; a durao da nota indicada por uma linha que acompanha a nota ou acorde. H tambm notas de "palheta aberta" (ou "open notes"), representadas por uma barra roxa, que requerem que o jogador palhete sem apertar nenhum outro boto. Alm das notas normais, existem "hammer-ons" e "pull-offs" (HOPOs) e "tap notes", que no exigem que o jogador as palhete para acert-las; a diferena entre estes dois tipos que uma sequncia de HOPOs deve ser iniciada com uma palhetada, e o jogador deve palhetar novamente caso erre uma nota. Certas notas tambm podem fazer parte de uma sequncia de "star power", marcada por uma srie de notas contornadas por uma estrela. Acertar tal sequncia com sucesso recompensa o jogador com o "star power", que pode ser usado para dobrar o multiplicador de combo por tempo limitado, bem como ajud-lo a no falhar em uma msica difcil, caso o modo que permite a falha esteja ativado.